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EasyLys-I 昆蟲活性蛋白提取試劑
ECOTOP貨號:ES-6225售價:¥338.00
EasyLys-I 昆蟲活性蛋白提取試劑
【保存條件】 4℃保存,一年有效。室溫保存,至少2周內有效。-20℃可以保存更長時間。 【概述】 本產品能夠快速、溫和、有效地抽提昆蟲細胞或組織的總蛋白,抽提的蛋白能較好地保持其原有的空間結構和生物學活性,可用于多種生物化學和細胞生物學用途。例如,帶有His、GST、HA、Flag、Myc、V5等標簽蛋白的分離純化,免疫印跡(Western blot)、免疫沉淀(Immunoprecipitation)、免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)和ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay)等常規生化分析,luciferase、β-gal、alkaline phosphatase、chloramphenicol acetyltransferase (CAT)等報告基因(Report gene)酶活性檢測,PKA、PKC和酪氨酸激酶(tyrosine kinase)等蛋白激酶活力的檢測等方面的用途。 【操作方法】 1. 溶液的準備 取適量的昆蟲活性蛋白抽提試劑,根據具體實驗目的加入適量的蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,也可以根據實驗目的選不含磷酸酶抑制劑的蛋白酶抑制劑混合物。放置于冰浴備用。 2. 懸浮培養昆蟲細胞的蛋白抽提 a. 收集細胞:對細胞進行計數,并確定總的細胞數。800g室溫離心5min,棄上清。 b. 洗滌細胞(可選做):用PBS洗滌細胞,800g室溫離心5min,棄上清。如有必要,可以再重復洗滌一次。 c. 裂解細胞:彈擊離心管底,使細胞沉淀適當分散開。每0.5-2×107個細胞加入冰浴預冷的1ml 昆蟲活性蛋白抽提試劑,用移液器吹打混勻,再以中速渦懸震蕩約5秒后置于冰上孵育10min。如果希望獲得更多的蛋白,或者對于一些較難裂解提取的蛋白,則需要額外的孵育時間以提高得率。額外的孵育時間,可能會增加蛋白得率。 d. 12,000-16,000g (16,000g更佳) 4℃離心15min。 e. 將含有可溶性蛋白的上清轉移到新的離心管中,立即用于后續分析檢測,或者-20℃或-80℃保存備用。如有必要,可以考慮保留沉淀物用于后續分析。 3. 貼壁培養昆蟲細胞的蛋白抽提 a. 洗滌細胞(可選做):吸除培養液,加入適量PBS,輕輕搖動,吸除PBS重復洗滌一次。如有必要,可以再重復洗滌一次。 洗滌過程中應盡量避免貼壁細胞的脫落,如果發生細胞脫落,可以收集相應的培養液或PBS溶液,800g離心5min,以沉淀并收集脫落的細胞。 b. 裂解細胞:吸凈細胞培養液或洗滌液,參考下表,加入適量的昆蟲活性蛋白抽提試劑,冰上孵育10min。冰上孵育期間,可以將培養器皿放置在水平或側擺搖床上劇烈搖動、敲擊細胞培養瓶細胞培養側的外壁或用細胞刮刮下貼壁細胞。通常直接孵育5-6min后,昆蟲細胞會逐漸出現從培養器皿表面脫落的現象。 培養板/皿 表面積(cm2) 裂解液用量(μl) 10-cm dish 55 500-1000 6-cm dish 21 200-400 6孔板 9.5 100-200 12孔板 3.8 50-100 24孔板 1.9 25-50 48孔板 0.95 12.5-25 96孔板 0.32 5-10 c. 用移液器將細胞抽提產物吹打懸起并轉移到離心管中,12,000-16,000g (16,000g更佳) 4℃離心15min。 d. 將含有可溶性蛋白的上清轉移到新的離心管中,立即用于后續分析檢測,或者-20℃或-80℃保存備用。如有必要,可以考慮保留沉淀物用于后續分析。吸取上清時觸及沉淀會導致抽提產物中含有更多的雜蛋白等 【注意事項】 1. 該產品僅實驗室使用,不適合農業/家庭/臨床用途使用。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
EasyLys-B 細菌活性蛋白提取試劑(免超聲)
ECOTOP貨號:ES-6215售價:¥240.00
EasyLys-B 細菌活性蛋白提取試劑(免超聲)
【保存條件】 4℃保存,一年有效。室溫保存,至少2周內有效。 【概述】 本產品能夠快速、溫和、有效地在不需要機械破碎的情況下溫和地從革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細菌中提取蛋白質,抽提的蛋白能較好地保持其原有的空間結構和生物學活性,可用于多種生物化學和細胞生物學用途如親和純化等。 【產品特點】 即用型—在 Tris 或磷酸鹽緩沖液配方中使用溫和的非離子去污劑(專有)對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌的一步法細胞裂解 快速且簡便—只需將 EasyLys-B試劑加入細菌沉淀中,通過混合10-15分鐘進行孵育并在?;毎槠蠡厥崭鞣N可溶蛋白 可兼容—完全可與添加蛋白酶抑制劑兼容,所獲得的蛋白提取物可被用于蛋白測定、各種常見的親和純化方法(如 GST、6xHis)和其他應用 【操作方法】 1. 離心收集細菌細胞:以5000×g的速度離心10分鐘,收集細菌細胞沉淀。稱量菌體重量,并繼續進行下一步,或將菌體凍存在-20°C到-80°C之間。 2. 準備裂解液:將所需量的EasyLys-B試劑(每克菌體沉淀加入5 mL試劑)恢復至室溫。添加相應蛋白酶抑制劑,現配現用。 注意:對新鮮制備的革蘭氏陰性細胞(如E. coli BL21菌株)裂解時,向試劑中加入最終濃度為1 mM的EDTA(即每毫升EasyLys-B試劑加入2μL的0.5M EDTA)??蛇x擇添加溶菌酶至終濃度0.2mg/ml,可增強裂解。選擇添加Benzonase全能核酸核至終濃度50U/ml,可降解裂解后液體粘秱度。 3. 加入裂解液:按每克細胞沉淀加入5 mL裂解液(含蛋白酶抑制劑/EDTA等)。用移液器上下吸打懸液(或渦旋),直至完全均勻。 4. 室溫孵育:在室溫下輕輕搖動孵育15分鐘。 5. 離心分離:以16,000×g的速度離心20分鐘,以分離可溶性蛋白和不溶性蛋白。 6. 小心地從細胞碎片中吸取上清可溶性蛋白部分至另一新管中。使用SDS-PAGE和/或Western blot分析上清液和不溶性部分,以確定哪一部分含有目標蛋白。 【故障排除】 問題 可能原因 解決方法 蛋白質產量低 細菌裂解不充分 將裂解孵育時間延長至1小時 將裂解緩沖液與細胞沉淀物的比例提高至每克菌體沉淀加10mL裂解液 為了提高裂解率,請將細菌沉淀進行至少經過一次凍融循環 【注意事項】 1. 該產品僅實驗室使用,不適合農業/家庭/臨床用途使用。 2. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
EasyLys-M 哺乳動物組織/細胞活性總蛋白提取試劑
ECOTOP貨號:ES-6220-100ml售價:¥298.00
EasyLys-M 哺乳動物組織/細胞活性總蛋白提取試劑
【保存條件】4℃保存,有效期1年?!靖攀觥坎溉閯游锘钚缘鞍壮樘嵩噭?EasyLys-M Mammalian Native Protein Extraction Reagent),是一種用于快速、高質量、高產量、高活性提取哺乳動物細胞或組織的細胞漿蛋白、細胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白提取試劑。本品與Thermo的M-PER? Mammalian Protein Extraction Reagent以及Sigma的CelLytic? M mammalian cell lysis/extraction reagent非常相近,使用效果和用途也非常相近,很多時候可以考慮相互替代。 本試劑制備的細胞裂解物可直接與各種報告基因檢測(例如熒光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰轉移酶)、蛋白激酶檢測(例如 PKA、PKC、酪氨酸激酶)、免疫檢測(例如 Western 免疫印跡、ELISA、RIA)和/或蛋白純化程序兼容?!井a品特點】l 兼容性強:抽提的可溶性蛋白處于非變性狀態,可直接用于免疫沉淀反應和其他親和純化過程l 作用溫和:溫和的除垢劑裂解,產生的抽提物直接與考馬斯(Bradford)和BCA蛋白定量分析試劑或SDS-PAGE兼容l 非變性:維持熒光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他報告基因的活性,與其他供應商的產品和冷凍/解凍方法一樣好或更出色l 操作簡單:貼壁細胞直接在板上裂解或者在剝離和洗滌后懸浮于溶液中【使用建議】取1ml的預冷裂解液中加入相應體積蛋白酶抑制劑混合物(如需磷酸化研究則需添加磷酸酶抑制劑);混勻,放置在冰上備用;1. 樣品前處理(具體用量參考表1):a) 對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔細胞量加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。b) 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。c) 對于組織樣品:把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入200-400μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器或其它設備勻漿,直至充分裂解。2. 后處理:冰上或4℃振蕩孵育裂解5-10分鐘(振蕩孵育有助于提升裂解效率,組織可延長裂解時間至20分鐘)。將裂解后的樣品最大轉速或14000g于4℃下離心5-10分鐘,取上清蛋白質轉移到新的離心管中,即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。(暫時不使用蛋白盡快保存于-80℃中,即用即取,避免反復凍融,避免長時間凍存)。表1. 不同規格的細胞培養器皿中EasyLys-M 哺乳動物活性蛋白抽提試劑的用量表。細胞孔板或培養皿面積(cm2)提取試劑用量100mm55500-1000μl60mm21200-400μl6-well plate9.5100-200μl24-well plate1.925-50μl96-well plate0.325-10μl【注意事項】1. 抽提蛋白產量低可能性:a. 細胞或組織裂解不充分。延長冰上孵育時間或在孵育期間適當搖動,或適當增加蛋白抽提試劑的使用量。b. 蛋白發生降解。加入蛋白酶抑制劑可抑制蛋白降解。c. 組織勻漿不太充分。適當延長勻漿或研磨時間。d. 蛋白溶液的粘稠度太高。一方面可以考慮加大抽提試劑的用量,另一方面可以考慮添加全能核酸酶等以降低粘稠度2. 該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)-1ml×10管
ECOTOP貨號:ES-8155-1ml×10管(貨期:現貨)售價:¥280.00
6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)-1ml×10管
【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。 【使用建議】 1. 室溫或37℃水浴解凍6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液,并搖晃混勻。 2. 請按每50μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(6倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【效果圖】 【注意事項】 1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 該產品于-20℃保存時會出現SDS沉淀,使用前請確保溶液完全復溶混勻,有必要時可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。 6. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)-10ml
ECOTOP貨號:ES-8155-10ml(貨期:現貨)售價:¥160.00
6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)-10ml
【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。 【使用建議】 1. 室溫或37℃水浴解凍6×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液,并搖晃混勻。 2. 請按每50μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(6倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【效果圖】 【注意事項】 1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 該產品于-20℃保存時會出現SDS沉淀,使用前請確保溶液完全復溶混勻,有必要時可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。 6. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)-1ml×10管
ECOTOP貨號:ED-8522-1ml×10管(貨期:現貨)售價:¥260.00
5×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液(DTT)-1ml×10管
【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 上樣緩沖液包含兩種跟蹤染料:藍色(溴酚藍),用于跟蹤電泳的進度;粉紅色(pyronin Y),用于在Western印跡過程中監測蛋白質向膜的轉移。 【使用建議】 1. 室溫或37℃水浴解凍5×SDS-PAGE雙色蛋白上樣緩沖液,并搖晃混勻。 2. 請按每40μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(5倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【效果圖】 【注意事項】 1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 該產品于-20℃保存時會出現SDS沉淀,使用前請確保溶液完全復溶混勻,有必要時可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍、吡羅紅指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 5. 一般而言,吡羅紅的遷移速度快于溴酚藍。在較高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝膠(例如15%)中,吡羅紅染料的遷移速度比溴酚藍慢。 6. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(DTT)-1ml×10管
ECOTOP貨號:ED-8129-1ml×10管(貨期:現貨)售價:¥240.00
5×SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(DTT)-1ml×10管
【保存條件】 建議分裝凍存,避免反復凍融,-20℃避光保存,有效期1年 【概述】 5×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液可保護蛋白質在樣品制備步驟中免受熱降解,并在SDS-PAGE運行期間防止pH值變化。一些蛋白質對在Tris緩沖液中電泳期間溫度波動引起的pH變化敏感,優化后的上樣緩沖液組分可防止在SDS-PAGE電泳之前的樣品加熱過程中以及電泳過程中蛋白質降解。SDS可與蛋白質結合使蛋白質-SDS復合物上帶有大量的負電荷,這時蛋白質本身的電荷完全被SDS掩蓋,消除了各種蛋白質本身電荷的差異;SDS還可以斷開分子內和分子間的氫鍵,破壞蛋白質分子的二級和三級結構。DTT可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵,破壞蛋白質結構,消除了蛋白結構之間的差異。最終無電荷及結構上差異的蛋白(亞單位),電泳速度只是與其分子量大小有關。 溴酚藍作為指示劑,用于追蹤電泳進度。 【使用建議】 1. 室溫或37℃水浴解凍5×SDS-PAGE單色蛋白上樣緩沖液,并搖晃混勻。 2. 請按每40μl蛋白樣品加入10μl上樣緩沖液的比例(五倍稀釋)來使用。如果蛋白樣品濃度過高,可用雙蒸水稀釋。 3. 混勻后,100℃水浴加熱5-10分鐘,使蛋白變性。 4. 冷卻至室溫后,10000-14000rpm離心2-5分鐘,取上清直接上樣電泳即可。 【注意事項】 1. DTT對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。 2. 該產品于-20℃保存時會出現SDS沉淀,使用前請確保溶液完全復溶混勻,有必要時可置于37℃水浴促溶。 3. 蛋白上樣緩沖液含有溴酚藍指示劑,PH值受保存溫度影響,在低溫凍存狀態下,溶液可能會呈現深棕色,不影響產品使用。 4. 聚丙烯酰胺凝膠濃度為8%時溴酚藍指示條帶的位置大概在30kd左右, 膠濃度為12%時,約在20kd左右,膠濃度為15%時,大概在10kd。請根據自己目標條帶來判斷結果電泳時間。 5. 為了您的安全與健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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