【保存條件】

-20℃避光保存，有效期1年。

【概述】

Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33258也常用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。

Hoechst 33258的最大激發波長為346nm，最大發射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，最大激發波長為352nm，最大發射波長為461nm。

本品Hoechst 33258染色液可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。

【使用方法】

該產品使用時應室溫解凍并充分搖勻。

1. 對于固定的細胞或組織：

a. 對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續步驟進行Hoechst 33258染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續的Hoechst 33258染色。

b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

c. 吸除Hoechst 33258染色液，用PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

2. 對于活細胞或培養的組織：

a. 加入適當量Hoechst 33258染色液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于6孔板一個孔需加入1ml 染色液，對于96孔板一個孔需加入100微升染色液。

b. 在適宜于細胞培養的溫度培養20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養液洗滌2-3次即可進行熒光檢測。細胞發生凋亡時，在熒光顯微鏡下觀察會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

【注意事項】

1. 本品為進口原料配制，成像與穩定效果更佳。

2. Hoechst 33258對人體有害，請注意適當防護。

3. 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用ES-8312抗熒光淬滅封片劑。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。